Cytométrie
Présentation
La plateforme de cytométrie met à la disposition de la communauté scientifique des cytomètres analyseurs et trieurs de dernière génération. Elle propose également l’expertise de son personnel pour la mise au point de protocoles expérimentaux ou de nouvelles applications en cytométrie, de panels multi-couleurs, et l’assistance pour l’analyse des données de cytométrie.
La plateforme de cytométrie est ouverte à tous les instituts de recherche et aux sociétés privées.
La technique de cytométrie de flux permet l’analyse multi-paramétrique, de façon très rapide, de cellules individualisées en suspension au sein d’un échantillon qui peut être constitué de populations cellulaires différentes, voire extrêmement rares. Les cytomètres trieurs sont capables de collecter séparément les sous-populations cellulaires identifiées, ou de déposer une cellule unique spécifique dans chacun des puits de plaques 96 ou 384 puits à des fins de clonage ou d’analyses au niveau de la cellule unique.
Localisation
Plateforme de cytométrie de la SFR Necker
Faculté de Médecine Université de Paris
156-160 rue de Vaugirard
75015 Paris
Tél : 01 40 61 54 73
La plateforme de cytométrie de SFR Necker se trouve au 1er étage du bâtiment de la faculté.
Personnel
IE Inserm
Sara Rohou
AI-CDD
Équipement
Sony MA900 dédié au tri infectieux
4 sources d'excitation: lasers 405, 488, 561 et 638nm
12 fluorochromes peuvent être détectés simultanément
Buses 70, 100 et 130um
Vitesse de tri: 12 000 cellules / seconde
Trieur confiné sous PSMII
Prestations
Prestations assistées : L’utilisateur est assisté du personnel de la plateforme pour ses mises au point expérimentales, ou si l’utilisation des cytomètres est peu fréquente.
Prestations non assistées : Le personnel de la plateforme forme les utilisateurs sur tous les cytomètres pour qu’ils deviennent autonomes.
La plateforme met également à disposition des logiciels d’analyse des données tels que Diva, Sony, FlowJo, Kaluza, mais également d’analyse haute-dimension par réduction de dimensionnalité de données multi-couleurs complexes : OMIQ
Applications en cytométrie :
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phénotypage, multi-marquages membranaires et intracellulaires
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analyse des cellules transfectées avec des systèmes rapporteurs fluorescents (GFP, mCherry…)
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analyse des cellules souches hématopoïétiques « Side Population » (Hoechst 33342)
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étude du cycle cellulaire mono-paramétrique (Cellules perméabilisées : IP, Cellules intactes : Hoechst33342), étude du cycle cellulaire multi-paramétrique (Incorporation de nucleosides : BrdU, EdU, Marquage de l’ARN avec la Pyronine), étude du cycle cellulaire avec les indicateurs colorés (rouge et vert) génétiquement encodés FUCCI
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analyse de la mort cellulaire par apoptose
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étude des paramètres vitaux de la cellule : prolifération cellulaire (CFSE), potentiel membranaire mitochondrial (JC-1, DiOC2, MitoTracker), activité enzymatique, intégrité membranaire (IP, colorants Sytox,7-AAD), étude des voies de signalisation (phospho-protéines)
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dosages multiplex (cytokines) avec le BD Cytometric Bead Array
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étude du flux calcique (Indo-1)
La plateforme peut développer des nouvelles applications en fonction du potentiel technologique des équipements et de leur évolution possible.
Publications
Severe hematopoietic stem cell inflammation compromises chronic granulomatous disease gene therapy. Sobrino S., Magnani A.,Semeraro M., Martignetti L.,Cortal A., Denis A.,Couzin C., Picard C., Bustamante J., Magrin E., Joseph L., Roudaut C., Gabrion A., Soheili T., Cordier C., Lortholary O.,Lefrere F., Rieux–Laucat F., Casanova J. L.,Bodard S., Boddaert N., Thrasher A. J.,Touzot F., Taque S., Suarez F., Marcais A.,Guilloux A., Lagresle–Peyrou C., Galy A., Rausell A.,Blanche S., Cavazzana M., Six E. Cell Rep Med 2023 Feb 21 ;4(2):100919
doi : 10.1016/j.xcrm.2023.100919
Promitotic Action of Oenothera biennis on Senescent Human Dermal Fibroblasts. S. Ceccacci, K. Roger, I. Metatl, C. Chhuon, K. Tighanimine, S. Fumagalli, A. De Lucia, I. Pranke, C. Cordier, M. C. Monti and I. C. Guerrera. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23(23), 15153
doi : 10.3390/ijms232315153
Human anti-smallpox long-lived memory B cells are defined by dynamic interactions in the splenic niche and long-lasting germinal center imprinting. Chappert P, Huetz F, Espinasse MA, Chatonnet F, Pannetier L, Da Silva L, Goetz C, Mégret J, Sokal A, Crickx E, Nemazanyy I, Jung V, Guerrera C, Storck S, Mahévas M, Cosma A, Revy P, Fest T, Reynaud CA, Weill JC. Immunity. 2022 Oct 11;55(10):1872-1890.e9
doi: 10.1016/j.immuni.2022.08.019
Analysis of mRNA vaccination-elicited RBD-specific memory B cells reveals strong but incomplete immune escape of the SARS-CoV-2 Omicron variant. Sokal A, Broketa M, Barba-Spaeth G, Meola A, Fernández I, Fourati S, Azzaoui I, de La Selle A, Vandenberghe A, Roeser A, Bouvier-Alias M, Crickx E, Languille L, Michel M, Godeau B, Gallien S, Melica G, Nguyen Y, Zarrouk V,Canoui-Poitrine F, Noizat-Pirenne F, Mégret J, Pawlotsky JM, Fillatreau S, Simon-Lorière E, Weill JC, Reynaud CA, Rey FA, Bruhns P, Chappert P, Mahévas M. Immunity. 2022 Jun 14; 55(6):1096-1104.e4
doi: 10.1016/j.immuni.2022.04.002.
Direct contribution of skeletal muscle mesenchymal progenitors to bone repair. Julien A, Kanagalingam A, Martínez-Sarrà E, Megret J, Luka M, Ménager M, Relaix F, Colnot C. Nat Commun. 2021 May 17;12(1):2860.
Maturation and persistence of the anti-SARS-CoV-2 memory B cell response. Sokal A, Chappert P, Barba-Spaeth G, Roeser A, Fourati S, Azzaoui I, Vandenberghe A, Fernandez I, Meola A, Bouvier-Alias M, Crickx E, Beldi-Ferchiou A, Hue S, Languille L, Michel M, Baloul S, Noizat-Pirenne F, Luka M, Mégret J, Ménager M, Pawlotsky JM, Fillatreau S, Rey FA, Weill JC, Reynaud CA, Mahévas M. Cell. 2021 Mar 4;184(5):1201-1213.e14.
Toll-like receptor-9 stimulated plasmacytoid dendritic cell precursors suppress autoimmune neuroinflammation in a murine model of multiple sclerosis. Letscher H, Agbogan VA, Korniotis S, Gastineau P, Tejerina E, Gras C, Mégret J, Moe A, Drobyski WR, Zavala F. Sci Rep. 2021 Feb 26;11(1):4735.
Hepatitis B virus X protein promotes DNA damage propagation through disruption of liver polyploidization and enhances hepatocellular carcinoma initiation. Ahodantin J, Bou-Nader M, Cordier C, Mégret J, Soussan P, Desdouets C, Kremsdorf D. Oncogene. 2019 Apr;38(14):2645-2657.
A splenic IgM memory subset with antibacterial specificities is sustained from persistent mucosal responses. Le Gallou S, Zhou Z, Thai LH, Fritzen R, de Los Aires AV, Mégret J, Yu P, Kitamura D, Bille E, Tros F, Nassif X, Charbit A, Weller S, Weill JC, Reynaud CA. J Exp Med. 2018 Aug 6;215(8):2035-2053.
BAFF and CD4+ T cells are major survival factors for long-lived splenic plasma cells in a B-cell-depletion context. Thai LH, Le Gallou S, Robbins A, Crickx E, Fadeev T, Zhou Z, Cagnard N, Mégret J, Bole C, Weill JC, Reynaud CA, Mahévas M. Blood. 2018 Apr 5;131(14):1545-1555.
Periosteum contains skeletal stem cells with high bone regenerative potential controlled by Periostin. Duchamp de Lageneste O, Julien A, Abou-Khalil R, Frangi G, Carvalho C, Cagnard N, Cordier C, Conway SJ, Colnot C. Nat Commun. 2018 Feb 22;9(1):773.