Histologie
Présentation
La plateforme d'histologie dispose actuellement de l'ensemble des équipements nécessaires à la réalisation des techniques histologiques de routine sur les prélèvements fixés, congelés nécessaires, enregistrés ou frais, de la possibilité de virtualiser vos lames histologiques. La plateforme possède également des équipements spécifiques permettant la réalisation de reconstructions en 3D d'échantillons marqués (OHREM) et de projets de microdissection laser.
Notre mission est de prendre en charge vos échantillons selon votre demande (inclusion, coupe, coloration et/ou scan de lame en fond clair ou en fluorescence, HREM) et de former les utilisateurs sur différentes techniques histologiques (inclusion, immunohistochimie) et sur nos différents postes de travail disponibles à la réservation (microtome, cryostat, vibratome et microdissecteur laser).
Nous mettons à votre disposition notre expérience et la technologie de cette plateforme.
La plateforme est ouverte aux équipes académiques et privées des autres sites.
Nous serons heureux de vous aider avec des analyses spécifiques et de routine dans vos projets de recherche.
1- Pour les demandes courantes de service, veuillez remplir les formulaires dédiés et les envoyer par courrier électronique à histo.sfrnecker@inserm.fr
2- Pour toutes les demandes concernant la possibilité de développements technologiques innovants ou d'analyses collaboratives au-delà des services déjà proposés par la plateforme, merci de contacter la responsable de la plateforme Sophie Berissi par mail sophie.berissi@inserm.fr (cc référent scientifique Dr Ganna Panasyuk à ganna.panasyuk@inserm.fr )
Localisation
Plateforme d'Histologie
Faculté de Médecine Université de Paris
156-160 rue de Vaugirard
75015 Paris
Tél : 01 40 61 54 80/81
La plateforme est située au premier étage du bâtiment Faculté.
Personnel
Sofian Ameur
T Inserm
Damien Conrozier
IA Imagine
Équipements
Les équipements pour les techniques histologiques de routine :
Traitement des tissus déterminés :
Un automate d'infiltration des tissus sous vide (ASP300S, Leica) permettant la conduite de la déshydratation automatique et l'imprégnation en paraffine jusqu'à 300 échantillons par jour.
Une plaque d'inclusion (EC-350, Microm France) pour effectuer l'enrobage des tissus avec de la paraffine
Un déparaffineur de cassette (TR 302, Tech-Inter) pour retirer l'excès de paraffine autour du bloc réalisé.
Coupe des tissus :
Deux microtomes semi-automatiques (2 x HM 340E, Microm France) pour la réalisation des prestations de coupes en paraffine, ainsi qu'un microtome semi-automatique (RM2145, Leica) mis à disposition des utilisateurs
Une imprimante de lame (SlideMate, Thermo) pour l'écriture des lames
Un cryostat (CM3050S Leica) pour la réalisation de coupes congelées. Cet appareil est également accessible aux utilisateurs autonomes.
Un vibratome (VT1200) pour la réalisation sur tissus frais. Cet appareil est également accessible aux utilisateurs autonomes.
Coloration :
Un multistainer (ST5020-CV5030, Leica) permettant de réaliser les colorations classiques et spécifiques des tissus et d'effectuer le montage avec lamelle.
Un microscope (DME, Leica) permettant un contrôle constant de la qualité des coupes et des colorations
Scanner :
La plateforme dispose d'un scanner de lame (Nanozoomer 2.0 HT, Hamamatsu). Ce système permet de réaliser des lames virtuelles en fond clair ou en fluorescence. Les lames virtualisées sont exploitables via NDPview (logiciel d'observation et d'annotation Hamamatsu).
Caractéristiques :
Objectif 20x NA 0.75 à grossissement global 20X ou 40X
Chargeur jusqu'à 210 lames possible
Les équipements pour les techniques spécifiques :
Microdissecteur laser :
La plateforme dispose également d'un Microdissecteur Laser (Palm MicroBeam, Zeiss). Cet appareil vous permet, entre autre, d'étudier des acides nucléiques (ADN/ARN) et des protéines de sous-populations cellulaires spécifiques.
Caractéristiques :
Caméra imagerie en fond clair : AxioCam ICc1 rev.3
Capteur CCD 1392x1040= 1,4 mégapixels
Caméra imagerie en fluorescence : AxioCam MRm rev3
Capteur CCD 1392x1040= 1,4 mégapixels
Filtres : DAPI (EX 390-420, LP450), FITC/GFP (EX BP 450-490, EM BP 515-565), Rhodamine (EX BP 510-560, EM LP 590)
Les objectifs : 5x/0,25 ; 20x/0,4 ; 40x/0,6 ; 63x/0,75
OHREM :
La plateforme d'histologie possède un OHREM (Optical High Resolution Episcopic Microscope, Indigo Scientific). L'HREM est une technique d'histologie en 3D. Il est utile pour analyser et quantifier l'anatomie fine d'échantillons épais et volumineux et peut également fournir des images 3D de rapporteurs LacZ et HRP à partir d'échantillons transgéniques ou d'expériences ISH. Il n'est pas compatible avec les rapporteurs fluorescents, il n'atteint pas la résolution subcellulaire ; il est donc complémentaire des microscopes confocaux ou à feuillet de lumière, qui sont souvent limités dans la taille des échantillons pouvant être traités et ne sont pas compatibles avec les rapporteurs non fluorescents. Lien utile : https://dmdd.org.uk/hrem/
Caractéristiques :
2 sources de lumière : 585nm (marquage enzymatique) ou 470nm (morphologie)
Épaisseur de coupe : 1 à 5µm
Dimension de l'échantillon : jusqu'à 20mm
Résolution : 4 ou 12 mégapixels
Temps de coupe : 2 à 12 heures (dépend de la taille de l'échantillon et de la résolution).
Une loupe binoculaire (Stemi 508, Zeiss) pour l'orientation des échantillons lors de l'inclusion en résine pour la technique HREM
Un automate d'infiltration des tissus sous vide
(ASP300S, Leica)
Une plaque d'inclusion
(EC-350, Microm France)
Un déparaffineur de cassette (TR 302, Tech-Inter)
Prestations
Les prestations de routine
La plateforme prend en charge vos échantillons et réalise les prestations de votre choix :
l'inclusion en paraffine
la coupe : en congélation (5-30µm) et/ ou en paraffine (4µm) et/ou sur tissus frais
les colorations histologiques : coloration standard (Hématoxyline – Eosine, Bleu de toluidine) ou colorations spécifiques du collagène (Trichrome de Masson, Picro-sirius), des polysaccharides (Periodic Acid Schiff)
la virtualisation de lames en lumière blanche et en fluorescence.
l'inclusion d'échantillon en résine à destination de la coupe sur l'OHREM
la coupe d'échantillon inclus dans une résine et acquisition d'images grâce à l'OHREM.
Les formations
La plateforme assure aussi la formation d'un ou plusieurs membres de votre équipe :
à l'utilisation des équipements de microtomie : microtome, cryostat et vibratome
à la mise au point de marquages immuno-histochimiques
à la microdissection laser (formation et accompagnement)
Effectuer une demande de prestation/formation
Pour toute demande de prestation et/ou de formation, il est obligatoire de nous contacter par email à histo.sfrnecker@inserm.fr
Pour accéder aux différents services, il est impératif de souscrire sans réserve à la charte d'utilisation de la plateforme d'histologie. Une réunion est également proposée afin de discuter de votre projet, de vous proposer les différentes prestations qui répondent à votre besoin et de vous expliquer le fonctionnement de la plateforme d'histologie.
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